Iván Lozada-Requena

Objectives: To determine the percentage changes in the total lymphocyte population, T cells (TC), and their subsets; to determine the cellular exhaustion profiles of CD4+ and CD8+ TCs, and to determine the level of IgG (anti-spike) antibodies in individuals vaccinated with different vaccination schedules. Material and Methods: We isolated PBMC (peripheral blood mononuclear cells) from 45 vaccinated and 15 unvaccinated participants to measure percentages and MFI (mean fluorescence intensity) of TCs by flow cytometry. In addition, we obtained serum from 42 vaccinated participants, 9 unvaccinated participants, and 20 pre-pandemic controls to measure the concentration of specific IgG antibodies against the SARS-CoV-2 spike protein, respectively. Statistical data from this cross-sectional observational study were analyzed using GraphPad Prism 9. Results: Vaccination with 3P+1M+1P induced a lower %CD3+ than3P+1M; lower %CD8+ than 3P and 3P+1M, but higher %CD4+ than 3P+1M. All vaccinated or unvaccinated groups showed a negative correlation in which the higher the %CD8+ the lower the %CD4+. Cellular exhaustion in CD4+PD1+ of 3P+1M was higher than in all CD8+PD1+ of all vaccination platforms including the Unvaccinated, except 3P and the vaccinated or unvaccinated platforms in CD4+PD1+. No significant differences were found in the production of IgG (anti-spike) in the vaccination platforms. Conclusions. Homologous or heterologous vaccination platforms from 3 doses do not modify the production of IgG (anti-spike) antibodies; however, they improve the values of TC CD8+, which are the most important subset for the antiviral response against SARS-CoV-2.

Objetivo: Evaluar la inmunogenicidad humoral inducida por esquemas de vacunación homólogos y heterólogos mediante la comparación de dos métodos de detección de anticuerpos IgG contra el virus SARS-CoV-2. Materiales y métodos: Se determinó la concentración de anticuerpos IgG específicos contra el dominio de unión al receptor (RBD) de la proteína S del virus SARS-CoV-2. Para ello se colectaron muestras de suero provenientes de 60 individuos que recibieron diferentes esquemas de vacunación contra este virus, establecidos por el sistema de salud peruano. En el estudio se incluyeron 20 sueros colectados antes de la pandemia, almacenados en una seroteca. Se utilizó un ensayo inmunoenzimático tipo ELISA, considerado como prueba estándar para este tipo de determinación. Adicionalmente, se incluyó una prueba rápida de OJABIO (PRO) para la evaluación cualitativa de la respuesta de anticuerpos IgG. En el estudio se determinaron la sensibilidad, la especificidad, el valor predictivo positivo (VPP), el valor predictivo negativo (VPN), el índice kappa y el índice Wilson-Brown de la PRO con respecto a aquellos obtenidos mediante ELISA. Resultados: Ambos ensayos, cualitativo (PRO) y cuantitativo (ELISA), demostraron la presencia de anticuerpos IgG específicos contra la proteína S en el suero de todos los individuos vacunados. El resultado obtenido mediante ELISA indicó que la concentración de IgG es independiente del esquema de vacunación y del tiempo transcurrido desde la última dosis. Tampoco se encontraron diferencias significativas al considerar como variable de análisis la infección previa con el virus. La caracterización de la PRO demostró una elevada sensibilidad y especificidad, así como VPP y VPN adecuados. Conclusiones: Los esquemas de vacunación homólogos y heterólogos contra el SARS-CoV-2 indujeron una concentración y un tiempo de permanencia en circulación similares de anticuerpos IgG con potencial capacidad neutralizante, lo cual fue confirmado mediante un ensayo cuantitativo y otro cualitativo de alto rendimiento. La posible influencia de los esquemas homólogo y heterólogo en la frecuencia de las diferentes subclases de anticuerpos IgG constituye un aspecto de interés a explorar.

En la COVID-19, la inmunidad es fundamental. Poco se sabe de los mecanismos del factor de necrosis tumoral (TNF-α) y su capacidad de estimular la producción de anticuerpos anti-SARS-CoV-2. Asimismo, sobre la respuesta y agotamiento celular de los linfocitos T (LT). Objetivo: Evaluar el comportamiento, antes y después de la tercera dosis de vacunación, de los niveles de IgG (anti-spike), TNF-α y poblaciones linfocitarias incluyendo su agotamiento celular. Material y métodos: Se utilizó suero y células mononucleares de sangre periférica de sujetos con infección (G1, n=07) y asintomáticos (G2, n= 08 y G3, n=10) vacunados con la tercera dosis de la vacuna BNT162b2 (G1 y G2) o de ChAdOx1-S (G3). Se usó ELISA para determinar los niveles de IgG y TNF-α y citometría de flujo para determinar los niveles y el agotamiento celular de LT. Resultados: La IgG (anti-spike) antes y después de la tercera dosis no cambió. Se observó en G1 un aumento significativo de TNF-α después de recibir la tercera dosis. Los linfocitos totales (T, B y NK) mostraron una disminución significativa en G2 y, aunque los LT(CD3+) no variaron, en G3 sí hubo una disminución de LTCD4+ con aumento de PD-1+ y un aumento de LTCD8+ y PD-1+ antes y después de la tercera dosis, respectivamente. Se encontró una correlación positiva después de la tercera dosis en G3 entre IgG y CD4+PD-1+(p=0,034) y CD8+PD-1+(p=0,028), respectivamente. Conclusión: La respuesta humoral (IgG) e inflamatoria (TNF-α) no se modificó significativamente; la vacunación heteróloga (G3) incrementó los niveles de LT CD4+, una subpoblación que sostiene la inmunidad adaptativa antiviral. Adicionalmente, evito el agotamiento celular de LT.

La enfermedad causada por el nuevo coronavirus (COVID-19) se caracteriza por presentar fiebre y tos, afectar el tracto respiratorio inferior y estar asociada con la edad, comorbilidades y un sistema inmune debilitado. Típicamente se ha evidenciado linfopenias en los casos graves y una desmedida producción de citocinas inflamatorias (tormenta de citocinas), lo que explicaría el rol de la respuesta hiperinflamatoria en la patogénesis de la COVID-19. Las respuestas inflamatorias secundarias por reinfecciones del virus podrían inducir el aumento o la mejora dependiente de anticuerpos (ADE, por sus siglas en inglés), un fenómeno virémico que podría ser un mecanismo alternativo de infección celular y que se deberá tener en cuenta cuando se diseñen vacunas o inmunoterapias que involucren el estímulo de anticuerpos neutralizantes o el uso de anticuerpos monoclonales. Actualmente no existen vacunas ni tratamientos que demuestren seguridad y eficacia en pacientes con COVID-19; sin embargo, se espera la conclusión de los resultados de la aplicación de una vacuna de ácidos nucleicos ARNm (mensajero del ácido ribonucleico) y de un fármaco antiviral (remdisivir) que se encuentran en ensayos clínicos fase III. Por el momento la mejor medida para evitar la propagación de la infección es el aislamiento social exhaustivo y viene siendo adoptado por varios países según recomendación de la Organización Mundial de la Salud (OMS).

En los últimos años, las células troncales mesenquimales (Mesenchymal Stem Cells, MSC) han adquirido mucha importancia debido a su gran plasticidad y su capacidad de liberar factores paracrinos con capacidad de interactuar con diversos tipos celulares, tejidos y órganos. El uso de MSC en medicina regenerativa es importante debido a que, al no expresar las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) clase II ni moléculas co-estimuladoras y tener baja expresión del MHC clase I, haría que no sean rechazadas por individuos de la misma especie, es posible utilizarlas no sólo de manera autóloga, sino también, eventualmente, alogénica. Sin embargo, es importante demostrar científicamente muchas de sus propiedades, entre ellas las inmunomoduladoras. Al tener varias fuentes de obtención, se debe estandarizar la que sea la mejor para garantizar la pureza y calidad de las MSC. Finalmente, es importante que cuando se trabaje con estas células se demuestre completamente las características del cultivo celular, la inmunotipificación y su capacidad de diferenciación. Se están ensayando muchas aplicaciones clínicas de las MSC. Dentro de ellas, su capacidad para mejorar la recuperación y potencial curación de úlceras crónicas como las diabéticas, ha atraído la atención por su potencial impacto terapéutico.

Objetivos. Evaluar el efecto inmunomodulador del extracto estandarizado (5,03%, alcaloides oxindólicos pentacíclicos) de Uncaria tomentosa (UT-POA) sobre el inmunofenotipo de células dendríticas (DC) y IL-12/Th1/Th2/Th17 en pacientes con cáncer de mama estadio II (BCII) y mujeres sanas (H). Materiales y métodos. Se obtuvó sangre de 11 H y 7 BCII, se aislaron y cultivaron PBMC por 2 h con/sin distintas concentraciones de UT-POA y se estimularon o no con LPS por 24 h. Las PBMC fueron marcadas con anticuerpos específicos para DC y en el sobrenadante se midió las citoquinas Th1/Th2/Th17, ambos por citometría de flujo. Además, se midió IL-12 por ELISA. Resultados. UT-POA no alteró a las DC o la expresión de moléculas accesorias en BCII. Sin embargo, en H mostró una disminución en el porcentaje de DC mieloides (mDC) con incremento de HLA-DR y CD86 a 1000 μg/mL. La secreción de IL-12 fue modificada solo en H, incrementando la subunidad p70 y disminuyendo la p40. UT-POA incremento Th1 (IFN-γ y IL-2), Th2 (IL-4) y Th17 (IL-17) en BCII y H. Conclusiones. UT-POA incrementa la producción de citoquinas relacionadas con la respuesta antitumoral a concentraciones entre el rango de 500-1000 μg/mL. Este efecto positivo debería ser evaluado no solo sistemicamente sino también en el microambiente tumoral. La UT-POA puede ser un fitoquímico útil en la quimioprevención y en el uso alternativo con terapias contra el cáncer.

Poblaciones linfocitarias, células dendríticas y perfil de citoquinas en ratones con melanoma tratados con Uncaria tomentosa

This is a narrative review that shows accessible information to the scientific community about melanoma and immunotherapy. Dendritic cells have the ability to participate in innate and adaptive immunity, but are not unfamiliar to the immune evasion of tumors. Knowing the biology and role has led to generate in vitro several prospects of autologous cell vaccines against diverse types of cancer in humans and animal models. However, given the low efficiency they have shown, we must implement strategies to enhance their natural capacity either through the coexpression of key molecules to activate or reactivate the immune system, in combination with biosimilars or chemotherapeutic drugs. The action of natural products as alternative or adjuvant immunostimulant should not be ruled out. All types of immunotherapy should measure the impact of myeloid suppressor cells, which can attack the immune system and help tumor progression, respectively. This can reduce the activity of cellular vaccines and/or their combinations, that could be the difference between success or not of the immunotherapy. Although for melanoma there exist biosimilars approved by the Food and Drug Administration (FDA), not all have the expected success. Therefore it is necessary to evaluate other strategies including cellular vaccines loaded with tumor antigenic peptides expressed exclusively or antigens from tumor extracts and their respective adjuvants.

To evaluate the immunomodulatory effect on lymphocyte subsets, dendritic cells (DC), Th1 / Th2 / Th17 and inflammatory cytokines on systemic level and/or in the tumor microenvironment of mice with or without melanoma. Peripheral blood and/or primary tumors samples were obtained of mice with B16 melanoma treated or not with a hydroalcoholic extract of Uncaria tomentosa (UT) with 5.03% of pentacyclic oxindole alkaloids (UT-POA) obtained from the bark of the plant. All cell assays and cytokine measurements were performed by flow cytometry. UT-POA systemically increased CD4/CD8a relation while cell activation was inversely proportional; increased the proportion of DCm; induced a pro-inflammatory Th1 profile and reduced Th17 response. TNF-α and IL-17A positively and negatively correlated with CD4/CD8a relation. The increase of Th1 (TNF-α) may result in the increase of CD4 or M1 macrophage activation. Although UT-POA shows increased DCm, is not dose-dependent. Th17(IL-17A) decreased can support the function of CD8a lymphocytes. UT-POA shows better systemic immunomodulatory effects than intratumoral.

Objetives. This study aimed to research the in vitro immunomodulatory effects of an Uncaria tomentosa hydroalcoholic extract standardized (5.03%, pentacyclic oxindole alkaloids) (UT-POA) on the immunophenotype of dendritic cells (DC) subsets, Th1, Th2, Th17 and IL-12 cytokines from patients with stage II breast cancer (BCII) and healthy women (H). Blood of 11 H and 7 BCII was obtained, PBMC were isolated and cultured for 2h with/without various concentrations of UT-POA and stimulated or not with LPS for 24h. PBMC were labeled with specific antibodies for DC and in the supernatant we measured Th1/Th2/Th17 cytokines, both by flow cytometry. Furthermore IL-12 was measured by ELISA. UT-POA did not alter DC or accessory molecules expression in BCII. However, H exhibited a decrease in the percentage of mDC (myeloid DC) and an increase in HLA-DR and CD86 expression at 1000 μg/mL. IL-12 secretion was modified only in the H group, increasing p70 subunit and decreasing p40 subunit. UT-POA increased Th1 (IFN-γ and IL-2), Th2 (IL-4) and Th17 (IL-17) secretion in both groups. UT-POA increased the production of cytokines related with anti-tumoral response at concentrations of 500-1000 μg/mL. This positive effect should be evaluated not only systemically but also in the tumor microenvironment in further studies. UT-POA may be a useful phytochemical in chemoprevention and in the alternative use in cancer therapies.