V. A. Burlev

Background. It is known that deubiquitinasa and ubiquitin are important proteins that regulate inflammatory responses and metabolism of neuronal proteins by controlling the proteasomal pathway of their degradation. In addition, deubiquitinasa may be a biomarker of inflammation of neuronal origin. However, the role of deubiquitinasa and unconjugated ubiquitin as activators of microenvironment inflammation and pain in eutopic and ectopic endometrium in endometriosis has not been established. Objectives. To study the role of deubiquitinasa and unconjugated ubiquitin in eutopic and ectopic endometrium in patients with peritoneal endometriosis using immunohistochemical analysis, Western blotting, quantitative real-time polymerase chain reaction, enzyme immunoassay in blood and peritoneal fluid and compare these data with the presence of chronic pelvic pain. Method. Western blotting was used to quantify the content of conjugated and unconjugated ubiquitin in eutopic and ectopic endometrium in women with endometriosis. Immunohistochemical analysis was used to compare the results of ubiquitin expression in various cellular structures. Real-time quantitative polymerase chain reaction was used to assess ubiquitin gene expression. Determination of the concentration of ubiquitin in the peritoneal fluid and in the blood was carried out by enzyme immunoassay. All results were compared according to the presence or absence of chronic pelvic pain in relation to the control group. Results. In endometriosis in eutopic and ectopic endometrium, high levels of deubiquitinasa expression are observed, leading to the accumulation of unconjugated ubiquitin in the glands, which disrupts the process of proteasomal disintegration of proteins and affects the functional activity of the endometrium, namely the processes of pain induction. Conclusions. Overexpression of deubiquitinasa in microvessels and nerve fibers is combined with the expression of unconjugated ubiquitin in the epithelium of the glands and indicates a violation of the regulation of protein ubiquitinization in the endometrium due to the invasion of microvessels and nerve fibers. The determination of deubiquitinasa can serve as an indicator of the level of inflammation of the microenvironment in the endometrium to characterize the cause of pain.

К числу важных и неизученных направлений в исследовании эндометриоза следует считать оценку роли убиквитина и убиквитинирование. С момента открытия убиквитина возник большой интерес к этому небольшому, но широко распространенному в эукариотических клетках белку. Избыточное накопление в клетках убиквитинированного белка может приводить к нарушению функции и развитию патологического процесса. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Изучить роль конъюгированного и неконъюгированного убиквитина в эутопическом и эктопическом эндометрии у больных с перитонеальной формой эндометриоза с использованием метода вестерн-блоттинга, иммуногистохимического анализа, количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени, иммуноферментного анализа в крови и перитонеальной жидкости и сопоставить эти данные с наличием хронической тазовой боли. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Метод вестерн-блоттинга применяли для количественной оценки содержания убиквитина конъюгированного и неконъюгированного в эутопическом и эктопическом эндометрии у женщин с эндометриозом. Иммуногистохимический анализ использован для сравнения результатов экспрессии убиквитина в различных клеточных структурах. Количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени применена для оценки экспрессии гена убиквитина. Определение концентрации убиквитина в перитонеальной жидкости и в крови осуществляли методом иммуноферментного анализа. Все результаты сопоставляли в зависимости от наличия или отсутствия хронической тазовой боли по отношению к контрольной группе. РЕЗУЛЬТАТЫ Доказано увеличение содержания конъюгированного убиквитина в ткани эутопического и эктопического эндометрия при наличии боли, как и увеличение уровня не конъюгированного с белком убиквитина по данным вестерн-блоттинг анализа. Соотношение между этими белками показало наибольший вклад конъюгированного с белком убиквитина, а не свободного убиквитина. Разработанный метод вестерн-блоттинг анализа для идентификации конъюгированного убиквитина в ткани эутопического и эктопического эндометрия может быть использован для оценки экспрессии белка убиквитина как омиксного маркера нарушения убиквитин-протеосомальной системы и активности протеасом. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Конъюгированный с белками убиквитин является универсальным омиксным маркером, участвующим в накоплении убиквитинированных белков для последующей их деградации. Накопление убиквитинированных белков свидетельствует о нарушении в эутопическом и эктопическом эндометрии убиквитин-протеосомальной системы. Полученные результаты могут быть использованы в оценке состояния убиквитин-протеосомальной системы при эндометриозе.

Comparative analysis of the density of microvessels and angiogenic activity in eutopic endometrium during different phases of the menstrual cycle in patients with peritoneal endometriosis showed that peritoneal form of endometriosis is a paracrine disease with dysregulation of angiogenesis processes in the eutopic endometrium. Excessive angiogenesis in this condition promotes implantation of eutopic endometrium on the peritoneum. Angiogenesis in eutopic endometrium can be maintained due to high concentrations of vascular endothelial growth factor A in the peritoneal fluid.

We compared proliferative activity and levels of steroid receptors in the myometrium and myoma nodes in patients with uterine myoma in different phases of menstrual cycle. Maximum proliferative activity was observed at the periphery of myoma nodes in the the secretory phase of the cycle. The content of progesterone receptors at the periphery and in the center of myoma nodes was lower in the proliferative phase of the cycle than in the secretory phase. Steroid regulation of proliferative activity in the myoma nodes in the the secretory phase through modulation of the content of progesterone receptors is hypothesized.