Maria Pia Soto

Objetivo. Desarrollar y evaluar un método de bajo costo basado en celulosa para la purificación rápida y amplificación directa de ADN de Bordetella pertussis de hisopados nasofaríngeos. Materiales y métodos. Se prepararon discos de celulosa y se evaluaron diferentes parámetros (buffers de lisis/lavado, número de discos y elución de ADN). El método se acopló a una amplificación directa por PCR en tiempo real (qPCR) y se es­timó el rendimiento utilizando hisopados nasofaríngeos que fueron positivos (n=100) y negativos (n=50) para ADN B. pertussis por qPCR, comparado con el método basado en columnas de sílice. Se calculó el grado de concordancia, sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN). Se evaluó la factibilidad del método rápido para ser acoplado a un ensayo colorimétrico de amplificación isotérmica mediada por lazo (LAMP). Resultados. El método rápido con un disco de celulosa y buffer de lisis y lavado conteniendo PVP-40 y Tween 20, respectivamente, mostró una mayor capacidad para purificar ADN amplificable de B. pertussis. El método tuvo una sensibilidad de 89,0% (IC95%, 80,2%-94,9%) y una especificidad de 98,5% (IC95%, 92,1%-100,0%), con un buen grado de concordancia (Kappa=0,867; IC95% 0,788 – 0,946), respecto al método referencial. Los VPP y VPN fueron 98,6% (IC95%, 92,7,2%-100,0%) y 88,2% (IC95%, 78,7%-94,4%), respectivamente. Se evidenció una amplificación exitosa por LAMP, y se obtuvieron resultados comparables con el método por columnas de sílice. Conclusión. El método desarrollado es simple, de bajo costo y libre de equipos para la obtención rápida (60 segundos) de ADN en el punto de atención, y puede ser implementado en diversas técnicas moleculares orientados al diagnóstico oportuno y al estudio epidemiológico de tos ferina

Fascioliasis is an infectious parasitic disease distributed globally and caused by the liver flukes Fasciola hepatica or F. gigantica. This neglected tropical disease affects both animals and humans and it represents a latent public health problem due to the significant economic losses related to animal husbandry. For decades, Triclabendazole has been the unique anti-Fasciola drug that can effectively treat this disease. However, triclabendazole resistance in Fascioliasis has been more recently reported around the world, and thus the discovery of novel drugs is an urgent need. The aim of this study was to investigate the fasciocidal properties of 400 compounds contained in the Pathogen Box. The first stage of the screening was carried out by measuring the fasciocidal activity on metacercariae at a concentration of 33 µM of each compound (standard dose). Subsequently the 50% inhibitory concentration (IC₅₀) values of the most active compounds (n=33) were assayed on metacercariae and resulted in 13 compounds with IC₅₀ ≤ 10 µM. The second stage queried these compounds at 33 µM on adult flukes where seven showed high mortality rates > 50%. Four hit compounds were selected based on predicted nontoxic properties and IC₅₀ values obtained on adult worms resulted < 10 µM thus representing the best fasciocidal compounds tested here. Cytotoxicity assay on four types of cell lines demonstrated that three compounds are nontoxic at its most active concentration. In conclusion, three hit compounds identified in this proof-of-concept study are potential candidates in the discovery of new fasciocidal drugs. Further studies are warranted.